脲酶（UE）活性檢測試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

 規(guī)格：100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加3mL蒸餾水充分溶解； 試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存；

試劑三 A 液：液體 0.4mL×1 支，4℃保存；

試劑三 B 液：液體 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；

標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標準液。

產(chǎn)品說明：

微量法

脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產(chǎn)生氨和碳酸，對尿素轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N來反應(yīng)UE活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計/酶標儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

操作步驟： 一、樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10  的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測。

• 細胞/細菌：按照細胞/細菌數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500 萬個細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時間3min）； 然后4℃，12000g 離心15min，取上清置于冰上待測。

3. 血清（漿）或其它液體：直接檢測。二、測定操作：

1、可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min，波長調(diào)至 630nm，可見分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2、將 1mg/mL 氮標準液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。

3、加樣表：

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三、計算公式：

1、液體中UE活力的計算：

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE（U/mL）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷V樣÷T

=0.233×?A測定÷?A標準。

2、組織、細菌或細胞中UE活力的計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U/mg prot）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U/g鮮重）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷W。

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1百萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

UE活力（U /106 cell）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(細胞數(shù)量×V樣÷V提取) ÷T

=0.233×?A測定÷?A標準÷細胞數(shù)量。

C標準液：標準液濃度，2µg/mL；T：反應(yīng)時間，60min；V酶促：酶促反應(yīng)體系總體積，0.14mL；

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V提取：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g；細胞數(shù)量：以百萬計。注意事項：

1. ?A測定大于0.6時，建議將反應(yīng)混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進行測定。

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