兔臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內(nèi)容如下：

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A．適用儀器
zui大離心力可達(dá) 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B．耗材

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

1.首先制備組織單細(xì)胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)"。

2.取一支15ml離心管，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于

3ml）。

3.用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心20-30min。（注：

根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件，組織單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間

越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索，以達(dá)到分離效果）。

4.離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋

巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一15ml離心管中，向離心管中加入

10ml清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。

6.250g，離心 10min。

7.棄上清。

8.用吸管以5ml清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

9.250g，離心 10min。

10.重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

【注意事項(xiàng)】

1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，zui

好在取樣 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過(guò)6h后

分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離

心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面

會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

3.吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒

細(xì)胞數(shù)量增加。

4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí)，分離效果更佳。

5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)上海研謹(jǐn)生物以尋求幫助。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶(hù)可適當(dāng)進(jìn)行參考。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1.組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。

2.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

3.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

4.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸上海研謹(jǐn)生物科技公司搜索“細(xì)胞分離、

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)"，并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
出現(xiàn)情況                             出現(xiàn)原因                 建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層    轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短     適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中            轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后白環(huán)層彌散                        細(xì)胞密度過(guò)大                調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)                細(xì)胞密度過(guò)小                調(diào)整細(xì)胞密度

2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地

區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離

心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。