豬乙型腦炎病毒抗體檢測試 劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體( IgG )診斷試 劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英 文 名 稱 ： Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【規(guī)格】

96 T×2

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于定性測定豬血清中日本乙 型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG 抗體。 用于評估豬場豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況， 感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的 流行病學(xué)調(diào)查。

【檢驗原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗 ( ELISA )原理，由包被有高純度的豬乙型腦炎 抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗 豬 IgG 及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包 被抗原與樣本中的 JEV-IgG 結(jié)合，再與酶標(biāo) 抗豬 IgG 抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo) 抗豬 IgG 抗體"復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶 催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與 JEV-IgG 的量成 正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽

性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要成份】

1抗原包被板96 T×2

2酶標(biāo)記物22 ml

3樣本稀釋液50 ml

4陰性對照血清1.5 ml

5陽性對照血清1.5 ml

6顯色劑12 ml×2

7終止液12 ml

810×濃縮洗滌液50 ml

9蓋板膜2 張

10說明書1 份

【自備器材】

1 ．酶標(biāo)儀（雙波長 450/630 nm 濾光片）

2 ．微量移液器（單道 10-100 μl 、0.5-10 μl 、多 道 30-300 μl）

3 ．水浴箱或恒溫箱

4 ．微量振蕩器

5 ．一次性槍頭（10 μl ，200 μl）

6 ．去離子水

【樣本要求】

1 ．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采 集，2 ℃-8 ℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在 -20 ℃以下保存。

2 ．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維 蛋白及污染長菌的血清樣本。

【實驗準(zhǔn)備】

1 ．試劑盒組分回溫平衡:  試劑盒組分在實驗前，

先取出置室溫 30 min 。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平 衡至潮氣干盡后方可拆開。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將 樣本作 40 倍稀釋（例：將 5 μl 樣本加至 195 μl 樣本稀釋液中）。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液 直接用去離子水稀釋 10 倍（例：將 10 ml 洗滌液加入 90 ml 去離子水中）。若 10 倍濃 縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置 37 ℃ 至溶解后即可。

【操作步驟】

1.  加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測 時，設(shè)陰、陽性對照各 2 孔，分別加入不用 稀釋的陰、陽性對照血清 100 μl 于相應(yīng)孔中 （可不設(shè)空白對照）。其余為樣本孔，每孔加 100 μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本。

2.  溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置 37 ℃溫 育 30 min。

3.  洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng) 板孔，靜置 10 s ，直接甩出，洗滌 3 次，最 后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。

4.  加酶：每孔加酶標(biāo)記物 100 μl。

5.  溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板 膜，置 37 ℃溫育 30 min。

6.  洗板：同步驟 3。

7.  顯色：每孔加顯色劑 100 μl ，振蕩混勻， 37 ℃避光反應(yīng) 10 min。

8.  終止：每孔加終止液 50 μl，振蕩 10 s，充 分混勻，終止后即讀數(shù)。

9.  讀數(shù)：以 450 nm/ 630 nm 雙波長檢測，讀 取各孔吸光度值（OD 值）。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD 值。檢測結(jié)果有 效的條件是陽性對照孔的平均 OD 值≥0.60， 陰性對照孔的平均 OD 值＜0.40；樣品中抗 體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高 低由 S/P 值決定，S/P 值計算時按以下方式處

理:

—                       —

S/P=( 樣本 OD450/630 值－NCx )/（PCx -

—                                            —

NC x ) ，其 中 NC x 表示 陰性對 照孔平均

OD450/630 值（若小于 0.05，則按照 0.05 計算），

PC x表示陽性對照孔平均 OD450/630 值；

當(dāng)樣本的 S/P≥0.25 時判為陽性；樣品 S/P 值＜0.25 時判為陰性。

【注意事項】

1.  請在使用試劑盒之前，仔細(xì)閱讀說明書。

2.  請不要使用過期的試劑盒組分，不要將不 同批次的組分混合使用。

3.  本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗 廢棄物應(yīng)經(jīng) 121 ℃高壓蒸汽滅菌 30 min ，或 用 5.0 g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 min 后 廢棄。

4.  未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔 袋并密封 2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體試劑 應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中 于 2 ℃-8 ℃避光保存。

5.  應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常 校對其準(zhǔn)確性。

6.  加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有 游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

7.  終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng) 立即用大量清水沖洗干凈。

【儲存條件及有效期】

于 2 ℃-8 ℃避光保存，防止冷凍，有 效期 12 個月。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見外包裝盒

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